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作者:materialist (等级:17 - 华新水桶,发帖:21109) 发表:2006-07-15 20:48:10  楼主  关注此帖评分:
一头撞死……我的PCR经历……superviser 临走的时候丢给我们17对primer, 让我们测试他们是否可行。 Group member情况: 我,正在上LSM2202,学了PCR的一点皮毛。 QQ & YL: 从来没有做过。 上课的时候TA给过 9 things can kill your PCR, 而且给了个简便的温度计算公式。 老板走的时候给我们的实验流程的反应温度跟按照简便公式计算出来的差距超级大……但是老板坚持,那些试验就是按照这个温度设计的!给我们三种细胞的cDNA(NIH-3T3, D3 cell line ES cell, a Mix differenating cell) 进行测试。 无语,不争。因为温度的话,有更复杂的公式可以算,但是差别不至于特别大。我自己也不明白,照做。 YL 跑去hall 的活动不来了。QQ结束了华文辩论会但是两个星期后要回国(现在走了)。我在上课。没有人可以全力以赴做这个实验。时间是挤的。没有指导。 两个星期,试了N次,QQ的手戴塑胶手套都过敏了。没结果就是没结果。反应用的reagent, cDNA, primer, 温度……修改了好多次。没结果…… 摘抄我一周前的blog... Run the PCR for whole week and did not get any result. It did not show any band!!! The cell line we use is mouse ES cell, D3 cell line, that is a high passage number cel (more...)
good
you may use <<Qiagen Taq polymerase kit handbook for PCR>> for your reference. this handbook has useful information for optimizing PCR procedures.

my boss said that Protocal gives you 1/4 information, because the person who wrote protocal asumes the readers have the left 3/4 knowlodge. that is to say you can 't depend on protocal esp when you do not have much background knowledge.
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